欧宝体育app登录:【瑞士步琦】冷冻枯燥含酵母菌的微球运用

　　益生菌是一种有益于人体健康的微生物，常被用于改进肠道菌群。微胶囊包埋技能能协助维护菌株，延伸其在体内的存活时刻，不易受外界环境的影响而失活。因而，在出产益生菌产品时，需求细心考虑挑选正真合适的微胶囊技能，以确保益生菌的安稳性和活性。下面这篇运用十分好的结合了微胶囊包埋和冷冻枯燥技能，证明菌种经过包埋枯燥后仍具有生物活性，为发酵工艺和食物转化等范畴拓荒新的可能性。

　　贮存的便利性和添加邮递微生物的可能性。此外，制得的产品只需求少数维护，培育基在贮存进程中不会遭到污染，微生物能够长时刻坚持生机。

　　但是，众所周知，冷冻枯燥技能对微生物至关重要，由于它对微生物的生存能力和生理状况都有负面影响。依据办法和生物体的不同，微生物存活率也各有不同；但是，生机水平显着低于液氮贮存

　　。观察到的生机下降主要是由于一些不良副效果引起的，例如细胞内冰晶的构成1、灵敏蛋白的变性或在此进程中膜脂质的物理状况产生一些不可逆的改变3,5。为防止这种影响，通常在冷冻或冷冻枯燥前运用脱脂牛奶、蔗糖、甘油、 DMSO 或海藻糖等作为冻干维护物质1,3。

　　据报导，海藻糖在枯燥、冷冻、浸透钳制和热休克等极点环境下对酵母和细菌具有维护效果。

　　这些维护效果与膜的安稳和酶活性的保存有关。关于海藻糖的维护效果，现已报导了几种假定。一些报导以为它的效果是经过多个外部氢键替代参加坚持蛋白质三级结构的水分子，另一些报导以为它构成玻璃态结构以确保物理安稳性。

　　除了发酵进程或食物转化，酿酒酵母或乳酸菌等微生物在益生菌膳食食物和饲料弥补剂范畴具有极端严重的经济含义。但是，这些运用需求在贮存进程中坚持细胞生机。经过造粒和冷冻枯燥技能相结合，能够取得巨细和组成均匀的无尘颗粒。由于具有更高的颗粒表面积，这使得产品将具有十分杰出的颗粒活动性，更简单把握的剂量和更快的产品恢复性。虽然存在上述应战，冷冻枯燥仍然是一种酵母、孢子真菌和细菌的便利保存办法，由于它们的

　　因而，本运用旨在出产酿酒酵母颗粒作为模型微生物，运用微胶囊造粒仪 Encapsulator B-390 作为造粒机，将酵母悬浮液揉捏进入液氮中构成单涣散球体，然后运用冷冻枯燥机 Lyovapor™ L – 200 进行冷冻枯燥处理。

　　无菌条件下进行的。将 84g 市售面包酵母悬浮溶解在 50mL 无菌 YPD 培育基(Sigma Aldrich)中。在酵母悬浮液中参加 50mL 无菌冻干维护剂培育基（5g 海藻糖(Sigma Aldrich)和 5g 脱脂牛奶溶于去离子水中），然后用微胶囊造粒仪 B-390 进行制粒(表1)。将揉捏后的液滴搜集在液氮浴中冷冻，然后转移到不锈钢托盘中，保存在 -25°C 的冰箱中进行冷冻枯燥。

　　编程软件，如表 2 所示。运用 LyovaporTML-200 Pro 枯燥腔体、可加热的搁板和环境空气。

　　冷冻枯燥后，将 1mL 无菌水参加 1mL 微球中，用以恢复样品。关于含有酵母菌的菌珠，对每个重组溶液进行10倍、100 倍和 1000 倍的接连稀释。将恢复后的溶液和稀释液别离涂于 YPD 琼脂平板上，如图 1 所示。琼脂板在 28℃ 培育 24h，点评细胞生机。

　　用微胶囊造粒仪 B-390 将酵母滴入液氮中，可使酵母敏捷颗粒化；用 300μm 的喷嘴和 1mm 的喷嘴别离制备了 700μm 和 1500μm 左右的微球。仅运用含冻干维护剂介质的溶液也得到了类似的成果。如图 2 所示，冻干后的微球在形状和巨细上与湿冻微球坚持类似。

　　▲图2：用微胶囊造粒仪 B-390 制得的 300μm 酵母微球，在冻干前（左）后（右）的比照

　　。为了验证酵母菌的生机，将酵母菌从头水合，稀释，并在 28°C 的 YPD 琼脂板上培育 24 小时。图 4 证明了文献报导的内容，即使失去了部分生机，酵母在冻干后依旧能成长2,4,6,10。

　　L-200 进行冷冻枯燥处理。B-390 的喷嘴直径别离为300 μm和1000 μm，制得的微粒直径别离为 700μm 和 1500μm。冷冻枯燥后，珠粒的巨细和形状没有改变。该颗粒活动性好，简单把握运用剂量，且与水混合后溶解速度快。冻干后的微生物在储藏进程中仍能坚持杰出的生机，并能在复水化后成功成长。

　　造粒包埋和冷冻枯燥的结合显现出了十分好的试验成果。它能够在发酵工艺和食物转化等范畴拓荒新的可能性，有利于出产制备剂量易操控和重组的培育发酵剂；别的，在益生菌和食物弥补剂范畴中取得无尘且可自在活动的粉末，一起确保产品颗粒巨细和组成的均匀度。

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